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三例输入性卵形疟的实验室诊断

日期:2015-12-04 00:04:48 来源: 《中文无码医学》杂志 点击:

田斌, 段绩辉, 徐明忠, 张兵, 廖瑜, 申晓君, 文岚
长沙市疾病预防控制中心 

    卵形疟原虫(plasmodium ovale)是感染人类的疟原虫,首次发现最有可能是在1900年[ 1]。因其感染患者具有间日发热等特点,一直被认为是间日疟原虫(plasmodium vivax)的变种,直到1922年Stephens[ 2]才对该种疟原虫进行了完整的形态描述和命名。目前其地理分布局限在热带非洲、中东、巴布亚新几内亚、印度尼西亚的西伊里安查亚省和东南亚地区[ 3]。我国对卵形疟的报道极为鲜见。随着国际间交流的不断扩大与加深,输入性疟疾病例的数量也呈逐年增加的态势[ 4],给国内大部分疟疾消除地区的实验室诊断工作提出了新的挑战。我们分析了3例输入性卵形疟的实验室诊断,以提示检测人员应警惕卵形疟的误诊与漏诊。

材料和方法

一、标本来源

标本为3例输入性卵形疟患者的静脉抗凝血,制作厚薄血膜涂片后-70 ℃冻存备检。病例情况如下:患者A,男,44岁,刚果(布)务工,2012年1月18日回国,回国至本次发病期间无外出史,本次发病日期2012年4月25日,症状为畏寒、发热(39.9 ℃,不规则)、发冷伴腹泻。该患者曾于2011年4月在刚果(布)发病,境外医疗机构未进行实验室检查,予青蒿素类注射剂治疗3 d后症状消失;患者B,男,22岁,塞拉利昂务工,2012年12月4日回国,回国至本次发病期间无外出史,本次发病日期2012年12月27日,症状为发热(38.4 ℃,不规则)、发冷、出汗,曾于2012年6月在境外出现类似症状,未行实验室检查,予青蒿素类注射剂治疗3 d后症状消失;患者C,男,25岁,尼日利亚黑人,发病前3周入境,于2012年12月31日发病,症状为发热且时间不规则,否认既往患过疟疾。

二、试剂与仪器

Giemsa染液为实验室自配;DNA提取试剂为QIAamp DNA Micro Kit;聚合酶链反应(PCR)扩增试剂为Invitrogen公司Platinum PCR SuperMix;显微照相系统购自德国Leica公司;PCR扩增仪购自美国ABI公司;电泳仪和凝胶成像系统为英国SYNGENE公司产品。

三、方法

1. 厚、薄血膜涂片检查 按张进顺等[ 5]描述的方法进行制作厚、薄血膜涂片,行Giemsa染色后显微镜检查并照相。

2. 核酸扩增及序列分析 采用巢氏PCR对疟原虫18S rRNA基因进行扩增,按文献[ 6, 7, 8]提供序列由Invitrogen公司合成引物,见表1。第1轮扩增体系为上下游引物(10 μmol/L)各1 μL,Platinum PCR SuperMix 18 μL,DNA模板5 μL,计25 μL体系;第2轮扩增体系为上、下游引物(10 μmol/L)各1 μL,Platinum PCR SuperMix 16 μL,以第1轮反应产物1 μL作为模板,补去离子水至25 μL,各种特异性引物分别加入体系,不共用体系。扩增条件第1轮和第2轮相同,均为95 ℃ 5 min,1个循环;94 ℃ 30 s,58.5 ℃ 30 s,72 ℃ 90 s,36个循环;72 ℃ 5 min,1个循环;4 ℃,∞。扩增完成后对第2轮扩增产物进行琼脂糖电泳检测。产物测序由宝生物工程(大连)有限公司完成。

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